争议：NRAS驱动癌症的新靶点——STK19

　　RAS基因突变广泛存在于多种肿瘤组织，且多发生于癌症早期。RAS蛋白是一种分子开关，与三磷酸鸟苷（GTP）结合时呈激活状态，与二磷酸鸟苷（GDP）结合呈关闭状态。通过这两种形式之间的切换，RAS蛋白调控包括RAF-MEK-ERK、PI3K/Akt/mTOR在内的多个下游通路，从而影响细胞的生长分化以及肿瘤的发生和发展。当RAS基因发生致癌突变会导致RAS蛋白异常持续激活。

　　RAS家族有3种主要亚型：KRAS、HRAS、NRAS，其中KRAS是最常见的突变基因，在肺癌和结直肠癌等恶性肿瘤中都有较高的发生率。NRAS在RAS突变肿瘤中也占有重要地位，多见于黑色素瘤、急性髓性白血病及结直肠癌等。

　　在过去很长一段的时间内，RAS蛋白一度被认为是一种「不可成药蛋白」：在化学药开发方向，RAS蛋白结构平滑，表面结合小分子的疏水性口袋不明显；在生物药开发方向，药物穿透细胞膜靶向RAS蛋白的递送效率还有待提升。近年来，针对这类蛋白相关药物的开发取得了重大进展，目前至少有5种KRAS调节剂处于临床开发阶段。此外，已有的临床研究数据表明，靶向治疗尤其是NRAS突变的黑色素瘤，具有重要的治疗价值。

　　6月25日，来自北卡罗来纳大学教堂山分校和慕尼黑大学两位科学家在Nat**e Reviews Drug Discovery上发表文章讨论了针对NRAS驱动癌症的有希望的靶点——STK19[1]。

　　作者提到，RAS三磷酸鸟苷酶（GTPase）的致癌突变发生在约20%–30%的人类肿瘤中。然而，RAS蛋白是极具挑战性的药物靶点，目前尚无选择性的NRAS直接***被报道。最近，丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶19（STK19）被认为是NRAS活性的调节因子，STK19***的开发可能是相关肿瘤的一个新的干预机会。

　　生物学功能

　　20多年前，STK19首次被描述为一种新颖的可以磷酸化α-酪蛋白和组蛋白的丝氨酸/苏氨酸激酶，但直到最近关于它的研究鉴定还非常有限。2019年，波士顿大学医学中心崔儒涛教授、厦门大学生科院邓贤明教授、复旦大学附属肿瘤医院王鹏教授组成的联合研究团队在Cell杂志上发表文章指出，他们利用激酶组siRNA文库筛选发现STK19是NRAS的上游激活子，STK19的敲除抑制了NRAS的活性。研究团队还发现一种STK19突变体通过激活NRAS最普遍突变体NRASQ61R的下游信号，在驱动黑色素瘤发生中起着重要作用。此外，STK19的耗竭减少了活性NRAS的数量，降低了下游信号传导以及黑素细胞的增殖和肿瘤形成能力[2]。

　　STK19和NRAS之间的相互作用也被进一步研究，结果显示STK19对NRAS中进化保守的Ser89残基进行磷酸化，增强了NRASQ61R与效应蛋白BRAF、CRAF和PI3Kα之间的相互作用，促进了NRAS介导的黑色素细胞恶性转化。

　　约25%的皮肤黑色素瘤病例中STK19发生改变。对癌症基因组图谱计划（The Cancer Genome Atlas,TCGA）数据库的分析表明，STK19D89N突变占STK19突变的42%，是一种功能增益突变。有趣的是，如果致癌的NRASQ61R也存在，STK19D89N则进一步促进了人类黑色素细胞的增殖和肿瘤的形成。在小鼠中，与单独NRASQ61R突变相比，如果两种蛋白都发生突变，一年后黑色素瘤的发病率增加了7倍。

　　总之，这些发现证明了抑制STK19作为一种NRAS驱动的黑色素瘤治疗策略的潜力。此外，被STK19磷酸化的NRAS Ser89残基在其他RAS家族成员中是保守的，这可能会增加那些STK19可能是有希望靶点的癌症范围。

　　候选化合物

　　目前针对STK19的文献报道化合物稀少，主要可能是因为STK19没有被包含在更广泛的激酶筛选panel中。然而，上文提及的崔教授等人最近发表的论文表明，基于喹唑啉的激酶***ZT-12-037-01是STK19的一种有效且高度选择性的***（IC50=35 nM）。ZT-12-037-01在小鼠异种移植模型中显示了对STK19磷酸化的剂量依赖性抑制和NRASQ61R突变型黑色素瘤生长的抑制作用[2]。

　　两种已报道的STK19***的结构和特性

　　天然产物Chelidonine最近也被鉴定为STK19***（IC50=113 nM），其选择性比ZT-12-037-01弱。在小鼠模型中，Chelidonine也抑制了NRAS驱动的肿瘤生长[******>

　　研究者们认为，这两种***为进一步研究STK19生物学和确定RAS驱动癌症的潜在候选药物提供了良好的起点。

　　然而，2020年6月11日，英国弗朗西斯·克里克研究所Jesper Q.Svejstrup研究组在Cell杂志上发表文章对崔教授等人的研究结果——STK19在NRAS依赖的黑色素瘤中作为驱动因子发挥功能提出质疑[4]。

　　他们指出该研究中：

　　1）STK19基因注释有误，STK19基因编码的是一个29 kDa的蛋白，而41 kDa版本的STK19几乎不存在；

　　2）STK19中存在一定几率出现D89N的突变，但该突变只是启动子区域没有功能的突变，不太可能促进NRAS依赖的黑色素瘤生成；

　　3）STK19是一种核蛋白，对MEK-AKT信号传导几乎没有影响，似乎不是一种激酶。

　　崔教授研究团队随后作出回复[5]：

　　1）通过再次分析数据库中的STK19肽段可以发现，41kDa长度的STK19确实存在，只是表达量相较于29kDa的亚型来说丰度较低。Svejstrup组使用的培养条件与他们之前的研究[2]存在一定的差异，而这可能会影响黑色素瘤细胞的分化状态从而影响STK19的表达量；

　　2）关于D98N突变在NRAS驱动黑色素瘤生成的功能实验中，除了崔教授团队还有其他几个**的研究小组证明了STK19 D89突变在皮肤癌中具有统计学意义的驱动突变[6–8]；

　　3）STK19最初被鉴定为一种激酶，因为它能够结合ATP并能在丝氨酸/苏氨酸残基磷酸化α-酪蛋白，在丝氨酸残基磷酸化组蛋白[9]。基于质谱、同位素标记磷酸化和ADP-GloTM激酶检测，崔教授团队证明从昆虫细胞纯化或从人类细胞中免疫共沉淀的商用STK19可以磷酸化NRAS。此外，对于Svejstrup组发现STK19并不会影响与NRAS相关的磷酸化事件（如对MEK/AKT信号的影响）。崔教授团队发现在检测磷酸化蛋白实验中Svejstrup组使用了牛*和PBST缓冲液，而牛*中的磷蛋白和PBST中的磷酸盐离子会对某些抗磷特异性抗体产生干扰。

　　最后，关于Svejstrup组指出崔教授团队使用细胞提取物中的STK19进行实验，不能排除是STK19相关蛋白发挥激酶作用的论断，崔教授团队表示接受，因为目前的证据不能排除STK19相关蛋白对激酶活性的贡献。

　　崔教授团队认为还需要进一步的工作来确定STK19每个亚型中潜在的分子内相互作用是否以及如何被调节；每个亚型是否具有不同的功能、亚细胞定位和相互作用伙伴。最重要的是，未来的工作需要确认哪些与STK19相互作用的激酶可能参与磷酸化和激活NRAS。

　　相关论文：

　　[1]Christopher R.M.Asquith et al.STK19:a new target for NRAS-driven cancer.Nat**e Reviews Drug Discovery(2020)

　　[2]Chengqian Yin et al.Pharmacological Targeting of STK19 InhibitsOncogenic NRAS-Driven Melanomagenesis.Cell(2019)

　　[3]Ling Qian et al.TargetingNRAS-Mutant Cancers with the Selective STK19 Kinase Inhibitor Chelidonine.Clinical cancer research(2019)

　　[4]Marta Rodríguez-Martínez et al.Evidence That STK19 Is Notan NRAS-dependent Melanoma Driver.Cell(2019)

　　[5]Chengqian Yin et al.A Reply to‘‘Evidence that STK19 Is Not an NRAS-Dependent Melanoma Driver」.Cell(2019)

　　[6]Chang,M.T.,et al.Identifying rec**rent mutations in cancer reveals widespread lineage diversity and mutational specificity.Nat.Biotechnol.(2016).

　　[7]Garman,B.,et al.Genetic and Genomic Characterization of 462 Melanoma Patient-Derived Xenografts,Tumor Biopsies,and Cell Lines.Cell Rep.(2017).

　　[8]Hodis,E.,et al.A landscape of driver mutations in melanoma.Cell(2012).

　　[9]Gomez-Escobar,N.,et al.The G11 gene located in the major histocompatibility complex encodes a novel nuclear serine/threonine protein kinase.J.Biol.Chem.(1998)